Aplicação de laparoscópio veterinário na coleta de oócitos bovinos fertilização in vitro
Aplicação do laparoscópio veterinário na coleta de oócitos bovinos pela fertilização in vitro.
A taxa de recuperação de oócitos coletados por técnica laparoscópica é mais simples do que a coleta de óvulos diretamente do ovário. Além disso, a laparoscopia veterinária pode ser usada para verificar o desenvolvimento folicular.
Inserção do laparoscópio: insira o trocarte rombo na cânula, insira a cânula na vagina, posicione a extremidade frontal da cânula na posição predeterminada da abóbada vaginal através da pinça retal, em seguida, retire o trocarte rombo, insira o trocater da pirâmide e ajuste o ângulo. Faça a direção do trocarte e o longo eixo da vaca ligeiramente para a direita em um ângulo de 10 ° e penetre com força a abóbada vaginal para cima. Se a resistência diminuir repentinamente, isso indica que a cúpula vaginal foi perfurada. Neste momento, retire o trocarte. Quando você ouve o som do ar entrando e a mão que segura o reto sente a expansão da cavidade abdominal ao mesmo tempo, isso indica que a posição do piercing está correta. A bainha de aço inoxidável com o cilindro do endoscópio é inserida na luva. De acordo com a sensação do reto, se a cavidade for pequena, ela precisa ser preenchida com um pouco de CO2. A velocidade da entrada de ar geralmente deve ser controlada em 7 ~ L / min. A quantidade de gás preenchida depende do tamanho da vaca."Geralmente, é cerca de 9L.
Coleta de oócitos: O operador de preensão retal deve ajustar constantemente a posição do laparoscópio e do ovário, e exibir a forma dos folículos e corpo lúteo em diferentes posições no ovário, a fim de determinar os folículos que precisam ser puncionados. Um assistente pega a senha do operador e o folículo exibido na tela de acordo com o reto, opera a agulha de punção, coleta o fluido folicular e coloca o fluido folicular no tubo de coleta que foi adicionado com uma pequena quantidade de fluido de cultura. Outro assistente é responsável por operar a bomba de vácuo de pé. Para evitar a perda de oócitos, deve-se ligar a bomba de vácuo (a pressão negativa deve ser de 100 mm Hg) antes da punção. Após a coleta, o fluido folicular é colocado no suporte de tubos de ensaio por 5-10 minutos, e o fluido folicular no fundo do tubo de coleta é sugado para a placa com um canudo e, em seguida, observado ao microscópio óptico. E os oócitos detectados são sugados para o tubo fino. As duas extremidades do tubo fino são seladas e os oócitos podem ser transportados para o laboratório para cultura madura. Após o término da operação, o cilindro do endoscópio é retirado e os dois assistentes pressionam os dois lados da parede abdominal da vaca para expelir o gás na cavidade abdominal. Quando o gás não é mais liberado, a cânula é retirada e a vagina é examinada a cada dois dias para evitar infecções. As duas extremidades do tubo fino são seladas e os oócitos podem ser transportados para o laboratório para cultura madura. Após o término da operação, o cilindro do endoscópio é retirado e os dois assistentes pressionam os dois lados da parede abdominal da vaca para expelir o gás na cavidade abdominal. Quando o gás não é mais liberado, a cânula é retirada e a vagina é examinada a cada dois dias para evitar infecções. As duas extremidades do tubo fino são seladas e os oócitos podem ser transportados para o laboratório para cultura madura. Após o término da operação, o cilindro do endoscópio é retirado e os dois assistentes pressionam os dois lados da parede abdominal da vaca para expelir o gás na cavidade abdominal. Quando o gás não é mais liberado, a cânula é retirada e a vagina é examinada a cada dois dias para evitar infecções.
Precauções:
1. Anestesia: nem muito rasa nem muito profunda. A anestesia eficaz é um pré-requisito para a conclusão da punção folicular para obtenção de oócitos. Se a anestesia for muito superficial, a vaca sentirá dor e isso afetará a precisão da operação, e a anestesia deve ser complementada. Se a anestesia for muito profunda, a vaca não ficará estável, nem mesmo se deitará, o que também afetará a operação. Se a vaca estiver deitada, a operação deve ser interrompida imediatamente e a cânula e o tubo laparoscópico devem ser retirados rapidamente. Ao mesmo tempo, deve-se prestar atenção para liberar o Baoding a tempo de evitar ferimentos na vaca.
2. Punção: a pinça retal deve agarrar corretamente o ângulo da punção ao puncionar a cúpula vaginal para evitar a punção do reto e do intestino grosso. Ao perfurar o folículo, a agulha não deve ser perfurada muito profundamente, caso contrário, danificará a substância ovariana e causará hemorragia. Isso não só contamina o fluido folicular, afeta a detecção de oócitos, bloqueia as agulhas e os dutos, mas também afeta o desenvolvimento dos folículos no ovário. recuperar. Em caso de sangramento, a punção do folículo deve ser interrompida imediatamente, a agulha e o cateter e o tubo de coleta devem ser substituídos, e a agulha e o cateter devem ser lavados com heparina 0,01mg / solução salina ML antes da próxima punção do folículo.
3. Coleta de fluido folicular: O fluido folicular coletado deve ser mantido a uma temperatura constante tanto quanto possível. É melhor detectar os oócitos imediatamente após a coleta, e colocá-los em meio de cultura maduro contendo FSH, embalá-los em tubos finos e transportá-los para o laboratório, geralmente de O tempo da colheita à incubadora para cultura de maturação não deve exceder 4h.
4. Habilidades: O uso bem-sucedido deste método requer não apenas um bom equipamento, mas também requer que o operador tenha um alto nível de conhecimento e proficiência na operação prática, bem como uma cooperação estreita com dois assistentes. Portanto, o treinamento necessário deve ser realizado antes da operação experimental.
Além disso, este método também pode ser usado para obter antecipadamente oócitos de vacas jovens, aumentando assim o período de utilização e o potencial reprodutivo das vacas e acelerando o progresso genético. Este método será uma boa forma de obter fontes de óvulos após superovulação e uso de ovários isolados.
